Från AEEA-monomer till dimer

Drug to Antibody Ratio (DAR) är ett nyckelkvalitetsattribut för antikroppskonjugerade läkemedel (ADC) som direkt påverkar effektivitet och toxicitet. Den ideala DAR är vanligtvis 2-4, men många effektiva nyttolaster som MMAE och DM1 har stark hydrofobicitet. Vid användning av kortkedjiga eller enkla PEG-länkar leder DAR över 4 till accelererad antikroppsaggregation och -clearance. Införandet av AEEA-AEEA ger en effektiv lösning på detta problem.
Jämfört med en enda AEEA-linker,AEEA-AEEAfördubblar PEG-kedjelängden och har starkare hydrofilicitet. Varje dimerenhet bidrar med 4 eterbindningar och 2 amidbindningar, som kan binda fler vattenmolekyler och bilda ett tätare hydratiseringsskikt. När flera hydrofoba läkemedel är anslutna till antikroppsytan genom AEEA-AEEA, kan hydreringsskiktet effektivt skydda de hydrofoba interaktionerna mellan läkemedel och förhindra antikroppsaggregation. Experimentella data visar att ADC:er konstruerade med AEEA-AEEA bibehåller kolloidal stabilitet (aggregationshastighet<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
DAR-regleringsstrategin hänvisar till förlänkningen av AEEA-AEEA till ett läkemedel i platsstyrd kopplingsteknologi och sedan reagera med konstruerat cystein på antikroppen. Genom att justera molförhållandet mellan länkläkemedel och antikropp (vanligtvis 3:1 till 10:1), kan DAR-värdet kontrolleras exakt. Till exempel kan ett 2-faldigt överskott ge DAR2-produkt, ett 4-överskott kan ge DAR4 och ett 8-faldigt överskott kan ge DAR6-8. HIC-HPLC eller masspektrometri kan exakt bestämma fördelningen av DAR. För tumörindikationer som kräver hög belastning, såsom bröstcancer med lågt HER2-uttryck och småcellig lungcancer, möjliggör AEEA-AEEA hög DAR och förbättrar signifikant tumördödande effekt. Prekliniska studier har visat att ADC för DAR6 ökar tumörhämningshastigheten med cirka 40 % jämfört med ADC för DAR4 vid samma dos, utan att signifikant öka toxiciteten.